關鍵詞：非實質細胞；猴肝星狀細胞；猴庫普弗細胞；猴肝竇內皮細胞；猴肝內膽管上皮細胞；猴免疫細胞；原代肝細胞；猴原代肝細胞；肝靶點；肝遞送；Non-Parenchymal Cells, NPCs；Monkey Hepatic stellate cells，HSCs; Monkey Kupffer cells, KCs; ;Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs; Monkey Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs;Monkey Immune cells; Primary hepatocytes；Primary Cynomolgus Monkey Hepcotytes,PCH; Liver-Targeted；Liver Delivery

肝臟（Liver）是藥物代謝的重要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎。其中，原代肝細胞（Primary hepatocytes）作為一種肝臟體外模型，因具有較好的體外試驗重現(xiàn)性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內一致的酶水平，成為了體外藥物試驗的“金標準"，廣泛應用于藥物代謝與毒理學等研究中。通常，我們所說的原代肝細胞（Primary Hepatocytes）即指的是肝實質細胞，占據(jù)肝臟總體積的60%，而剩余的40%則由非實質細胞（Non-Parenchymal Cells, NPCs）組成，主要包括肝星狀細胞（Hepatic Stellate Cells, HSCs）、庫普弗細胞（Kupffer Cells，KCs）、?肝竇內皮細胞（Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs）、肝內膽管上皮細胞（Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs)和部分免疫細胞（Immune cells）。這些非實質細胞（Non-Parenchymal Cells, NPCs）肝臟結構、功能、免疫調節(jié)以及疾病發(fā)展中起著重要作用。

此外，合適的模型對于藥物非臨床體外代謝研究而言更是錦上添花！其中，猴作為非人靈長類動物，其遺傳背景、生理結構和代謝途徑與人類高度相似，這使得其原代細胞成為預測人類藥物反應的"黃金標準"。因此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領者，現(xiàn)已有猴肝星狀細胞(Monkey Hepatic stellate cells，HSCs)、猴庫普弗細胞（Monkey Kupffer cells，KCs）、猴肝免疫細胞（Monkey Liver Immune cells），包含猴T細胞、猴B細胞和猴NK細胞等產(chǎn)品，并正同步研發(fā)猴肝竇內皮細胞（Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells）和猴肝內膽管上皮細胞（Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs），請大家持續(xù)關注。

圖片來源：網(wǎng)絡

01    猴肝星狀細胞 Monkey Hepatic Stellate Cells, HSCs

肝星狀細胞（Hepatic Stellate Cells, HSCs），位于肝臟竇周隙（Disse間隙） 中，即存在于肝細胞與肝血竇內皮細胞之間的狹小空間，屬于肝非實質細胞的一種，約占30%左右。在正常狀態(tài)下，HSCs形態(tài)不規(guī)則，有多個長的樹突狀突起，部分突起包繞肝血（類似于周細胞），且其最-顯著的特征之一是其胞質內含有大量富含維生素A（視黃醇）的脂滴。

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正常情況下HSCs表現(xiàn)為富含VitA脂滴的靜止型，其主要功能和特征如下：

· 代謝和貯存VitA 肝臟儲存有體內80%左右的維生素A，對體內維生素A的代謝起著重要作用。視黃醛在小腸內酯化后被運輸?shù)礁闻K并與特異的視黃醛結合蛋白結合，然后轉運到鄰近的HSC儲存。

· 儲存脂肪 正常HSC胞質內的脂滴含有大量的甘油三酯，為肝細胞提供能源。

· 合成和分泌膠原及糖蛋白、蛋白多糖等基質成分 HSC是正常及纖維化肝臟中細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）的主要合成細胞。HSC還能合成纖維連接蛋白、層連蛋白和粗纖維調理素等糖蛋白成分，以及硫酸皮素、硫酸軟骨素和透明質酸等蛋白多糖。

· 合成基質金屬蛋白酶及其組織抑制劑正常情況下，HSC能分泌多種膠原酶和基質降解蛋白酶如基質金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinase，MMP）-1、MMP-2等以降解各種細胞外基質,同時分泌組織金屬蛋白酶抑制劑（tissueinhibitorofmetalloproteinase，TIMP-1）防止膠原過度降解,使肝臟ECM的合成和分解處在一個動態(tài)平衡中。

· 表達細胞因子及受體正常情況下，HSC可以分泌肝細胞生長因子（HGF），參與肝細胞再生的調控。此外，HSC還能表達少量的轉化生長因子（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）、血小板衍生的生長因子（Plateletderivedgrowthfactor，PDGF）和胰島素樣生長因子（IGF）等，同時HSC能表達TGF-β1的II、III型受體和PDGF受體的α亞單位等。

· 參與肝竇血流調節(jié)HSC伸出胞突包繞著肝竇，通過其纖長突起的收縮功能調節(jié)肝竇內微循環(huán)，從而影響著肝臟的血流分布和門靜脈壓力。

然而，當肝臟受到炎癥或機械刺激等損傷時，肝星狀細胞被激活，其表型由靜止型轉變?yōu)榧せ钚停切纬筛渭〕衫w維細胞和引發(fā)多種疾病的關鍵。深入了解肝星狀細胞的生物學特性和調控機制，對于預防和治療肝纖維化、肝硬化及其相關并發(fā)癥（如門靜脈高壓、肝癌）具有極其重要的意義，且在近年來，HSCs因其獨特的生物學特性正逐漸成為肝靶向（Liver-Targeted）和肝遞送（Liver Delivery）研究的熱點。

02    猴庫普弗細胞 Monkey Kupffer cells，KCs

Kupffer細胞（Kupffer Cells, KCs），即庫普弗細胞或枯否細胞，也稱肝臟巨噬細胞（Hepatic Macrophages），是位于肝臟中的特殊巨噬細胞，是單核吞噬細胞系統(tǒng)的一部分，約占機體巨噬細胞總數(shù)的80-90%。Kupffer細胞定居于肝血竇中，與血管內皮細胞相毗鄰，在肝小葉間靜脈周圍常見。

Kupffer細胞具有吞噬、分泌功能、免疫調節(jié)與監(jiān)視作用。生理條件下，Kupffer細胞不僅能非特異地吞噬和清除血流中的細菌、病毒、內毒素和衰老紅細胞等物質，而且還具有特異性的免疫應答、抗腫瘤免疫、內毒素解毒、抗感染、調節(jié)微循環(huán)及物質代謝等方面的作用。Kupffer細胞可分泌多種細胞因子（如白細胞介素、腫瘤壞死因子），參與激活或抑制免疫反應。在病毒感染時，Kupffer細胞通過呈遞抗原激活T淋巴細胞，啟動特異性免疫應答。同時，它們也能通過釋放抗炎因子減輕過度炎癥反應，避免肝組織損傷。另外，庫普弗細胞表面存在著多種受體，可被多種配體激活，通過產(chǎn)生細胞因子、炎癥介質和活性氧等，在多種肝細胞損傷的發(fā)病過程中起到重要的作用。

圖片來源：IPHASE 猴Kupffer細胞

總之，Kupffer細胞（Kupffer Cells, KCs）在清除血液中的有害物質、調節(jié)免疫反應及維持肝臟微環(huán)境穩(wěn)定方面發(fā)揮重要作用，并與多種肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關。利用Kupffer細胞構建肝臟疾病相關3D細胞模型和類器官，可為肝臟疾病機制和藥物篩選提供更加高效的體外研究模型，更可用于肝靶向（Liver-Targeted）或肝遞送（Liver Delivery）藥物的優(yōu)化研究工具之一！

03    猴肝免疫細胞 Monkey Liver Immune cells

猴肝臟不僅是代謝和解毒的核心器官，同時也是重要的免疫調節(jié)中心，富含多種淋巴細胞亞群，包括B細胞、T細胞、自然殺傷細胞（NK細胞）和自然殺傷T細胞（NKT細胞）。這些細胞在肝臟獨特的免疫微環(huán)境中相互作用，共同維持免疫監(jiān)視、抗感染、炎癥調控和免疫耐受的平衡。肝臟作為一個“免疫器官"的特殊性在于其直接接收來自腸道門靜脈的血液，使其持續(xù)暴露于食物抗原、微生物產(chǎn)物和潛在病原體，因此需要精細的免疫調控機制來區(qū)分無害物質和有害威脅。

在靈長類（如猴）肝臟中，淋巴細胞的組成和功能與外周免疫系統(tǒng)存在顯著差異。例如，肝臟富含先天免疫細胞（如NK和NKT細胞），而傳統(tǒng)適應性免疫細胞（如B細胞和常規(guī)T細胞）的比例相對較低。這種獨特的細胞分布使肝臟能夠快速響應血源性感染（如病毒、細菌或寄生蟲），同時避免對無害抗原（如食物蛋白或共生菌成分）產(chǎn)生過度炎癥反應。

NK細胞

【特征】

①猴肝臟中NK細胞比例較高（約15-30%），尤其在肝竇中富集。

②其表型為CD56+（猴可能為CD16+）、NKG2D+、NKp46+，部分為組織駐留型（CD69+）。

【功能】

①直接殺傷：通過穿孔素/顆粒酶或死亡受體（如FasL）殺死腫瘤或病毒感染的肝細胞。

②分泌IFN-γ、TNF-α等細胞因子；

③與肝竇內皮細胞相互作用，參與免疫調節(jié)。

NKT細胞

【特征】

①兼具T細胞（TCRαβ+）和NK細胞（如NK1.1+）標志，識別CD1d提呈的脂類抗原；

②猴肝中NKT細胞比例顯著高于外周血（約5-20%）；

③分為兩個亞型：

Ⅰ型（經(jīng)典NKT）：表達半恒定的TCR（Vα24-Jα18），快速分泌Th1/Th2細胞因子；

Ⅱ型（非經(jīng)典NKT）：TCR多樣性更豐富，功能尚不明確。

【功能】

①雙向調節(jié)：可促炎（IFN-γ）或抗炎（IL-4、IL-10），依賴微環(huán)境信號；

②肝損傷與修復：在藥物性肝損傷（如猴模型中的對乙酰氨基酚毒性）中起關鍵作用。

T細胞

【特征】

分為三個亞型：

CD4+ T細胞（輔助性T細胞）：分泌IFN-γ、IL-4等細胞因子，調控B細胞和CD8+ T細胞應答；在肝纖維化中可能促進炎癥（Th1）或抑制免疫（Th2）。

CD8+ T細胞（細胞毒性T細胞）:占肝臟T細胞的主要部分（猴肝中可達50-70%），具有直接殺傷病毒感染肝細胞的能力；常表達活化標志（如CD69）和記憶標志（CD44）。

調節(jié)性T細胞（Treg）：表達FoxP3，抑制過度免疫反應，維持肝臟免疫耐受。

【功能】

①清除病毒感染的肝細胞（如猴免疫缺陷病毒SIV）；

②在肝移植免疫中參與排斥或耐受。

B細胞

【特征】

①猴肝臟中B細胞比例較低（約占肝臟淋巴細胞的5-15%），主要分布在門靜脈周圍和肝竇；

②表達CD19、CD20和表面免疫球蛋白（sIg），部分為記憶B細胞（CD27+）。

【功能】

①抗體產(chǎn)生：在病原體（如肝炎病毒）刺激下分化為漿細胞，分泌特異性抗體；

②抗原呈遞：通過MHC-II分子激活T細胞；

③免疫調節(jié)：分泌細胞因子（如IL-10）調節(jié)炎癥反應。

④在慢性肝?。ㄈ绾顱病毒感染）中可能參與自身抗體產(chǎn)生或免疫耐受。

總之，猴肝臟的免疫研究對理解人類肝?。ㄈ绮《拘愿窝?、肝纖維化、肝癌）的發(fā)病機制具有重要意義，也為器官-移-植和自身免疫病研究提供了獨特視角。未來，通過單細胞測序、多色流式等技術深入解析猴肝臟淋巴細胞的異質性，將有助于揭示新的免疫治療靶點，推動肝病精準醫(yī)學的發(fā)展。

04    猴肝竇內皮細胞 Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs

肝竇內皮細胞（Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs）是肝臟中一種特殊的內皮細胞，位于肝竇（肝血竇）內壁，構成肝竇的血管內襯，占據(jù)了肝非實質細胞的70%。 LSECs富含窗孔以及缺乏內皮下完整基底膜使之成為哺乳動物體內最-具有滲透性的內皮細胞，通過允許血漿中小分子自由通過和阻擋較大顆粒的形式來參與物質交換和代謝調節(jié)。與此同時，LSECs表面表達豐富的受體如SR-BI,和Stabilin-1/2等，可高效吞噬血液中的大分子廢物、病原體、衰老蛋白甚至是納米顆粒，因此，LSECs是體內重要的“血液凈化器"。

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LSECs是重要的藥物代謝參與者，尤其是首過代謝的重要成員。它們富含多種清除受體（如清道夫受體、甘露糖受體、Fc受體等），能主動攝取并降解血液中的多種內源性物質（如透明質酸、變性蛋白）和外源性物質，包括某些藥物分子、納米載體或大分子生物制劑（如寡核苷酸、抗體藥物偶聯(lián)物片段）。這種清除作用可能影響藥物的全身暴露量、藥代動力學特性和藥效。同時，LSECs表達多種藥物代謝酶（如CYP450同工酶，雖然活性通常低于肝細胞）和藥物轉運體，能進行部分I相和II相代謝反應，直接參與某些藥物的轉化或失活過程，補充肝細胞的代謝功能。理解LSECs對特定藥物的攝取和代謝能力對于預測藥物體內命運至關重要?？傊?，LSECs主要通過發(fā)揮抗炎、內吞、分泌促血管生成信號分子和維持HSCs表型等作用, 參與調控非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)、酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver, AFL)、肝細胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)、肝再生、肝纖維化等肝臟病理過程。

最后，在藥物安全性評價中，LSECs是肝毒性早期預警的關鍵哨兵。它們對藥物或其中間代謝產(chǎn)物誘導的損傷極為敏感。許多藥物（如對乙酰氨基酚過量、某些化療藥、生物制劑）或其活性代謝物可直接損傷LSECs或通過引起氧化應激、炎癥反應導致其功能障礙（窗孔收縮/消失，即“毛細血管化"）或死亡。LSECs損傷會破壞肝竇屏障完整性，導致肝竇充血、微循環(huán)障礙，并促進炎癥細胞浸潤和肝星狀細胞活化，最終可能發(fā)展為肝竇阻塞綜合征（SOS/VOD）或其他形式的肝損傷。因此，在臨床前研究（尤其是使用非人靈長類模型時）中，密切評估藥物對猴LSECs的結構和功能影響，是預測人類潛在肝竇毒性的重要環(huán)節(jié)，有助于早期淘汰高風險候選藥物或設計規(guī)避策略。

05    猴肝內膽管上皮細胞 Monkey Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs

肝內膽管上皮細胞（Intrahepatic Biliary Epithelial Cells,IBEpiCs)占肝臟細胞總數(shù)的3%～5%，是構成肝內膽管系統(tǒng)的主要功能細胞，分布于肝內二級膽管及其分支以上的膽管系統(tǒng)，主要覆蓋肝左葉和右葉的膽管分叉處。IBEpiCs呈立方或柱狀，具有頂膜和基底外側膜，從其頂膜延伸出來的微絨毛和初級纖毛具有特征性，微絨毛使細胞表面積增加了5倍，初級纖毛則能感受機械、化學刺激以及滲透壓的改變，是維持其細胞穩(wěn)態(tài)的關鍵。IBEpiCs的肌動蛋白細胞骨架具有助于維持膜張力、穩(wěn)定細胞形態(tài)和調節(jié)囊泡運輸?shù)墓δ堋?/span>

IBEpiCs具有分泌與吸收、炎癥修復和免疫屏障等作用：

【分泌與吸收】

IBEpiCs的頂膜和基底外側膜存在不同的離子載體和通道，分泌和吸收各種物質。IBEpiCs主要分泌物之一是膽汁，占膽汁總排出量的40%，其在膽汁生成中至關重要。此外，IBEpiCs還可以吸收膽汁酸、葡萄糖、氨基酸、水和各種離子，通過相關的轉運蛋白和通道蛋白實現(xiàn)雙向運輸。

【炎癥與修復】

IBEpiCs參與肝臟損傷引起的炎癥和修復反應。IBEpiCs經(jīng)各種損傷激活后可分泌多種細胞因子和趨化因子，包括轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、IL-8、CCL2、血小板源性生長因子-B（platelet derived growth factor-B，PDGF-B）等，這些因子會以自分泌和旁分泌的方式參與炎癥反應，致使IBEpiCs增殖、凋亡和衰老。隨著炎癥反應加劇，受損膽管周圍瘢痕組織過度沉積，引發(fā)病理性修復反應。

【免疫屏障】

IBEpiCs擁有復雜的免疫機制，是肝臟免疫調節(jié)的重要組成部分，IBEpiCs在未被激活狀態(tài)下，分泌包含IgA在內的多種抗菌蛋白，具有潛在的抗菌作用和免疫功能。IBEpiCs表達的Toll樣受體（toll-like receptors，TLRs），在識別抗原后會分泌抗菌蛋白、炎癥性細胞因子和黏附分子。同時，IBEpiCs作為抗原呈遞細胞還可表達人類白細胞抗原（human leukocyte antigen，HLA），促進免疫反應的定位。當IBEpiCs被各種損傷激活后，會分泌TNF-α、干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）、IL-6、IL-8、CCL2、CXCL16、HLA等參與免疫調控。

目前已發(fā)現(xiàn)肝內膽管上皮細胞在膽汁淤積性肝?。╟holestatic liver diseases，CLD）、肝纖維化( Hepatic fibrosis，HF) 和肝內膽管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）等肝臟疾病中扮演著關鍵角色。因此，合適的肝內膽管上皮細胞（Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs)模型顯得至關重要。而猴作為體外模型的“黃金標準"，猴肝內膽管上皮細胞（Monkey Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs)即是關鍵的“黃金模型"。

06    IPHASE 產(chǎn)品

綜上所述，非實質細胞（Non-Parenchymal Cells, NPCs）雖“默默無聞"，卻是肝臟健康的核心調控者。而猴的肝臟結構與人類高度相似，更是研究肝臟疾病的黃金模型。因此，猴肝非實質細胞實現(xiàn)了從免疫防御（T、NK、NKT及Kupffer細胞）到纖維化（Hepatic stellate cells，HSCs），從代謝（Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs）到再生（Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs）的全套體外研究模型，在體外共同構成了肝臟的“隱形守護者網(wǎng)絡"。

鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領者，為滿足市場對高質量猴非實質細胞模型的迫切需求，現(xiàn)已研發(fā)、生產(chǎn)出具有高活性、高純度且批次間差異小的猴肝星狀細胞、猴肝星狀細胞(Monkey Hepatic stellate cells，HSCs)、猴庫普弗細胞（Monkey Kupffer cells，KCs）、部分猴肝免疫細胞（Monkey Liver Immune cells），并正同步研發(fā)猴肝竇內皮細胞（Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells）和猴肝內膽管上皮細胞（Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs）。猴非實質細胞是連接基礎科學與臨床轉化的關鍵橋梁，更是突破肝病治療困境的轉化醫(yī)學樞紐，適用于肝臟纖維化機制研究、藥物靶點篩選、細胞互作分析及再生醫(yī)學等領域的探索。

IPHASE生產(chǎn)產(chǎn)品均具有以下優(yōu)勢：

合規(guī)性 生產(chǎn)產(chǎn)品的組織均由正規(guī)渠道獲得，來源清晰。

安全性 生產(chǎn)組織均經(jīng)過病原檢測，保證產(chǎn)品質量安全。

高質量 生產(chǎn)產(chǎn)品均經(jīng)過嚴格的內部質控，且同批次數(shù)量多，批次間差異性小。

可定制 可根據(jù)客戶特殊需求，提供特殊種屬肝組織細胞的定制服務。