慢病毒包裝試劑盒 Lentiviral Packaging Kit

產(chǎn)品介紹

    慢病毒經(jīng)濃縮后，可以高效地將基因穩(wěn)定地整合到宿主基因組中，特別適合用于難以通過常規(guī)方法轉(zhuǎn)染的細胞，如神經(jīng)細胞、干細胞和免疫細胞如原代T細胞等。IPHASE 慢病毒包裝試劑盒提供了慢病毒包裝所需用到的所有試劑，包含了慢病毒包裝質(zhì)?；旌衔風entivirus Packaging Plasmid Mix、轉(zhuǎn)染試劑Transfect Reagent、對照質(zhì)粒eGFP Plasmid （AMP+）和慢病毒濃縮液Lentivirus Titer-enhanced Solution，省去了試驗前準備的繁瑣過程，可直接使用，通過使用配套的濃縮液可以有效提高病毒滴度，提高慢病毒轉(zhuǎn)染便利性。試劑盒中各組成成分經(jīng)過嚴格的質(zhì)量檢測，實驗結(jié)果準確、可靠、重現(xiàn)性好。

產(chǎn)品詳情

中文名稱：慢病毒包裝試劑盒 Lentiviral Packaging Kit

英文名稱：Lentiviral Packaging Kit

規(guī)格：10 Test

保質(zhì)期：1年

保存條件：A盒——-15~-25℃，B盒——2~8℃

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：慢病毒、慢病毒包裝、慢病毒濃縮液、細胞轉(zhuǎn)染

產(chǎn)品組分：

使用方法

    提前制備轉(zhuǎn)染所需的293T細胞，使用Transfect Reagent把包裝質(zhì)粒、包膜質(zhì)粒和目標DNA eGFP 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染進293T細胞，細胞轉(zhuǎn)染6h后把培養(yǎng)基更換為完-全培養(yǎng)基，培養(yǎng)48h-72h，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，并使用lentivirus titer-enhanced solution對收集的上清液濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，可在293T細胞或者慢病毒滴度試劑盒中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內(nèi)的慢病毒顆粒可以滿足大部分體內(nèi)體外實驗需求。

1 細胞準備

1）將處于對數(shù)增長期的293T細胞按照6million/皿的兩傳代到100mm培養(yǎng)皿中，置于5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當細胞融合率達到80%左右時準備轉(zhuǎn)染。

2）轉(zhuǎn)染前1~2 h按照12mL/皿的量為需要轉(zhuǎn)染的細胞更換新鮮的DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

注：293T細胞貼壁性不好，更換培養(yǎng)基時應盡量避免沖起293T細胞。

2   轉(zhuǎn)染

1）  請于冰浴條件下解凍Lenti Packaging Plasmid Mix和eGFP Plasmid，并混合均勻。

注：Lenti Packaging Plasmid Mix和eGFP Plasmid需在-20℃冷凍保存，切勿反復凍融，若一次用不完，可于第一次化凍后按照需求量分裝并凍存。

2）準備兩個1.5ml無菌離心管，分別標記為管A和管B，按照以下表格進行體系配制：

3）混合均勻，并于室溫條件下平衡5min，備用。

4）將管A和管B的溶液合并，混合均勻后于室溫放置 18~20min 。

5）將混合液均勻滴加到預處理好的293T細胞培養(yǎng)皿中，放置在 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6）轉(zhuǎn)染6h~8h后，小心吸掉細胞培養(yǎng)液棄于盛有消毒液的廢液杯中，然后加15mL完-全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注：此時培養(yǎng)基與所用的移液槍頭等都已含有少量的病毒，必須經(jīng)消毒液浸泡處理后才能丟棄。

3 收集與濃縮

1）換液48h~72h后，轉(zhuǎn)移細胞上清液至50mL離心管，4℃，500g離心5min。

2）  收集離心后上清液，使用0.45μm濾器過濾后至新的離心管中。

3）按1：3比例加入Lentivirus Titer-enhanced Solution進離心后的上清液，2℃~8℃冰箱放置過夜。

4）4℃，1500g 離心 60min，棄上清。

5）加入原1/10或1/100的DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，建議使用轉(zhuǎn)染目標細胞培養(yǎng)基重懸，于-60℃~-90℃冰箱保存。

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